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磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法
磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法本文简介：磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法科研实验2010-04-2022:25:48阅读935评论0字号：大中小订阅0.01MPBSPBS(135mMNaCl,2.7mMKCl,1.5mMKH2PO4,and8mMK2HPO4，pH7.2)PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl137mmol/L，KCl
磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法本文内容：
磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法
科研实验
2010-04-20
22:25:48
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0.01M
PBS
PBS
(135
mM
NaCl,2.7
mM
KCl,1.5
mM
KH2PO4,and
8
mM
K2HPO4，pH
7.2)
PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl
137mmol/L，KCl
2.7mmol/L，Na2HPO4
4.3mmol/L，
KH2PO4
1.4mmol/L
称7.9g
NaCl，0.2g
KCl，0.24g
KH2PO4(or
1.44g
Na2HPO4)和1.8g
K2HPO4，溶于800
ml
蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1
L。保存于4℃冰箱中即可。
需要注意的是，通常所说的浓度0.01
M
指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na
离子或K
离子的浓度，Na
离子和K
离子只是用来调节渗透压的。
母液的配制：
0.2M
Na2HPO4：称取
71.6g
Na2HPO4-12H2O，溶于
1000ml
水
0.2M
NaH2PO4：称取
31.2g
NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml
水
各种浓度PB(pH=7.4)的配制：
先配
0.2M
PB
(pH=7.4，100ml)：取19ml
0.2mol/L的
NaH2PO4，
81ml
0.2mol/L
的
Na2HPO4,即可。
然后
只需将0.2M
PB
(pH=7.4)按相应比例适当稀释
即可，如：
0.1M
PB（PH=7.4）
：取
500ml
0.2M
PB，加水稀释至
1000ml
即可。
0.01M
PB
（PH=7.4）：取50ml
0.2M
PB，加水稀释至
1000ml
即可。
0.02M
PB
（PH=7.4）：取100ml
0.2
M
PB，加水稀释至
1000ml
即可。
若需要
NaCl的话，加入
NaCl
至0.9%（g/100ml）即可。
另：其它各种另
PH值的
0.2M
PB（100ml)配方
：
pH
0.2M
NaH2PO4（ml）
0.2M
Na2HPO4（ml）
5.7
93.5
6.5
5.8
92
8
5.9
90
10
6.0
87.7
12.3
6.1
85
15
6.2
81.5
18.5
6.3
77.5
22.5
6.4
73.5
26.5
6.5
68.5
31.5
6.6
62.5
37.5
6.7
56.5
43.5
6.8
51
49
6.9
45
55
7.0
38
62
7.1
33
67
7.2
28
72
7.3
23
77
7.4
19ml
81ml
7.5
16
84
7.6
13
87
7.7
10.5
90.5
7.8
8.5
91.5
7.9
7
93
8.0
5.3
94.7
0.01M
磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法
称取8g
NaCl、0.2g
KCl、1.44g
Na2HPO4和0.24g
KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4℃冰箱中。
需要注意的是，通常所说的浓度0.01M
指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na
离子或K
离子的浓度，Na
离子和K
离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话，则需要在配置的时候分别加入100
u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。
PH
7.6
7.4
7.2
7.0
H2O
1000
1000
1000
1000
NaCl
8.5
8.5
8.5
8.5
Na2HPO4
2.2
2.2
2.2
2.2
NaH2PO4
0.1
0.2
0.3
0.4
根据经验来看，新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在7.2-7.4之间，可是在温度的影响下，尤其在夏天，其电离常数发生了改变，在经过昼夜的时间后，PH值会明显改变（我亲自测过偏酸）。所以做实验的同学可要注意了，PH值可能会影响实验结果，甚至可能导致阴性。所以务必记得这个时候和天气，要加强实验条件控制问题。每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBS，如果发生偏酸或偏碱，注意重新换新液。
PBS缓冲液
称取NaCl
8g，KCl
0.2g，Na2HPO4?12H2O
3.63g,KH2PO4
0.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。
PBST缓冲液
取300μl
Tween-20
加入PBS
100ml中，混匀后即刻使用。现用现配。
如果是把所有固体加大十倍，配置为浓缩液，工作时候十倍稀释，那么，在刚配好浓缩液时，PH在6.5左右，明显偏酸。不能用盐酸调。虽然可以用氢氧化钠颗粒调，但是有更方便的方法。
十倍稀释以后，PH自动升高到所需要的值。不需要其它任何处理。这个可以先取少量试一试，配好之后再测一次~
PH8.0的PBS配方详细
1.
NaCl
137mmol/L，KCl
2.7mmol/L，Na2HPO4
4.3mmol/L，
KH2PO4
1.4mmol/L
2.
向烧杯中加入约800
ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.
滴加浓盐酸将pH值调节至8.0，然后加入去离子水将溶液定容至1
L。
4.
高温高压灭菌后，室温保存。
注意：上述PBS
Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1
mM
CaCl2和0.5
mM
MgCl2。
0.05mol/L
PBS(磷酸缓冲液Phosphate
Buffer
Solution，PBS)的配制：
甲液：0.05mol/L
Na2HPO4溶液
：称取磷酸氢二钠9.465g
7.099g,加蒸
馏水至1000ml
;
乙液：0.05mol/L
KH2P04溶液:
称取磷酸二氢钾,9.07g
6.803g,加蒸馏水至1000m1。
将甲乙液分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表:
pH
甲液ml
乙液mI
5.29
2.5
97.5
5.59
5.0
95.0
5.91
10.0
90.0
6.24
20.0
80.0
6.47
30.0
70.0
6.***
40.0
60.0
6.81
50.0
50.0
6.98
60.0
40.0
7.17
70.0
30.0
7.38
80.0
20.0
7.73
90.0
10.0
8.04
95.0
5.0
你要配制pH=6.8的PBS，可用甲、乙液各50ml混合即可。
有不少人认为常规漂洗用0.01M
PBS，配试剂用0.1M
PBS，但也有很多人不分浓度也没有出现问题；